Stress gum 115

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Affiliation: Institut de pharmacologie et de toxicologie, Université de Wurtzbourg, Wurtzbourg, Allemagne Résumé L'inflammation et le stress oxydatif sont connus pour être impliqués dans la pathogenèse de la maladie rénale chronique chez l'homme, et dans l'insuffisance rénale chronique (IRC) chez le rat. Le but de ce travail était d'étudier le rôle de l'inflammation et le stress oxydatif dans le CRF induit adénine et l'effet sur celui-ci de la prétendue gomme agent néphroprotectrices arabique (GA). Les rats ont été divisés en quatre groupes et traités pendant 4 semaines comme suit: contrôle, adénine dans l'alimentation (0,75, p / p), GA dans l'eau potable (15, p / v) et adenineGA, comme avant. L'urine, le sang et les reins ont été prélevés chez les rats, à la fin du traitement pour l'analyse des tests de la fonction rénale (créatininémie conventionnels au plasma et la concentration de l'urée). En outre, les concentrations de la TNF - cytokine pro-inflammatoire et oxydatif marqueurs de stress glutathion et la superoxyde dismutase, l'apoptose rénale, la formation superoxyde et l'ADN double fréquence de coupure du brin, détectée par immunohistochimie pour - H2AX, ont été mesurés. Adénine a augmenté de manière significative les concentrations d'urée et de la créatinine dans le plasma, une diminution significative de la clairance de la créatinine et a induit une augmentation significative de la concentration des médiateurs de l'inflammation mesurés. En outre, il a causé du stress oxydatif et de dommages à l'ADN. Le traitement par GA amélioré de manière significative ces actions. Le mécanisme de l'effet salutaire déclarée de GA dans le CRF induit adénine est associée à l'atténuation de l'inflammation induite par l'adénine et la génération de radicaux libres. Citation: Ali BH, Al-Husseni I, Beegam S, Al-Shukaili A, Nemmar A, Schierling S, et al. (2013) Effet de la gomme arabique sur le stress oxydatif et l'inflammation dans AdenineInduced insuffisance rénale chronique chez le rat. PLoS ONE 8 (2): e55242. doi: 10.1371 / journal. pone.0055242 Editor: Hideharu Abe, Université de Tokushima, Japon Reçues: 3 mai 2012, a accepté le 27 Décembre, 2012 Publication: 1 Février 2013 Copyright: 2013 Ali et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités. Financement: Ce travail a été soutenu financièrement par une subvention du Conseil de recherches d'Oman (RC / Med / Phar / 10/01), et l'Université Sultan Qaboos (SQU), par la Deutsche Forschungsgemeinschaft, accorder SCHU 2367 / 1-2 und l'Université de Wurtzbourg. La publication de ce travail a été financé par la Fondation allemande pour la recherche (DFG) et l'Université de Wuerzburg dans le programme de financement Open Access Publishing. Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit. Intérêts concurrents: Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent. Présentation maladie rénale chronique (IRC) est un grave problème mondial de la santé, et est maintenant considéré comme un élément déterminant de la mauvaise santé des principales maladies non transmissibles 1. Plusieurs facteurs influencent l'apparition et la progression de cette maladie rénale chronique, comme l'obésité, l'hypertension et le diabète sucré. Au-delà de ces facteurs, il existe des preuves d'un rôle physiopathologique pour l'inflammation et le stress oxydatif dans CKD et ses complications 2. Ces deux événements sont des caractéristiques importantes de CKD et de ses complications chez l'homme 3. 4. 5. 6. 7. oxygène accru la formation de radicaux a été trouvé en CKD, en présence d'une défense antioxydante réduite 8. les patients souffrent de microinflammation chronique et les infections 9. en outre, les marqueurs de stress oxydatif et l'inflammation sont augmentés, comme la peroxydation lipidique et la teneur en glutathion, ou de la protéine C-réactive (CRP) et le stress oxydatif et l'inflammation de l'IL-6 10. 11. 12. sont également des médiateurs de la maladie, exerçant des effets similaires dans l'insuffisance rénale chronique chirurgicalement induite (CRF) modèle chez le rat 13. 14. les patients atteints d'IRC ont des concentrations plasmatiques élevées des médiateurs inflammatoires (tels que la CRP, le facteur de nécrose tumorale (TNF) - et d'autres cytokines) et plusieurs marqueurs de stress oxydatif 15. 16. La gomme arabique (GA, E-Number 414) est un comestible, séché exsudat gommeux des tiges et des branches d'Acacia Sénégal et Acacia seyal. qui est riche en fibres solubles non-visqueux. Il est largement utilisé dans l'industrie pharmaceutique et alimentaire comme émulsifiant et stabilisant 17. Pendant des siècles, il a été utilisé comme une hygiène bucco-dentaire substance par de nombreuses communautés du Moyen-Orient et Afrique du Nord 18. En outre ses propriétés anti-inflammatoires ont été mis à profit dans la médecine populaire, où il a été utilisé en interne pour traiter l'inflammation de la muqueuse intestinale et externe pour couvrir la peau enflammée 19. Depuis quelque temps, GA est utilisé dans la médecine populaire arabe chez les patients avec CRF 17. 20. Expérimentalement, le traitement GA a été montré pour améliorer certains effets biochimiques, physiologiques et comportementaux chez les rats avec 24. cliniquement, GA a été montré induite adénine-CRF 21. 22. 23 et de moduler l'immunité chez la souris pour être bénéfique chez les patients avec CRF 25. et plus tard, cela a été confirmé chez les patients avec CRF au Soudan, où il a été affirmé pour aider diminuer les concentrations d'urée et de la créatinine plasmatique et réduit le besoin de dialyse de 3 à 2 fois par semaine 26. par la suite, des résultats similaires ont été obtenus auprès d'enfants urémiques en Irak 27 et les adultes urémiques dans Soudan central 28. la base de cet effet salutaire de GA sur la fonction rénale est probablement une (N) l'excrétion d'urée-effet de diminution grâce à l'utilisation de l'intestin comme un substitut du rein, l'augmentation de l'azote d'urée dans les selles, avec une diminution concomitante du N total excrété dans l'urine 17. 29. 30. les sorbants (telles que les résines) peuvent augmenter les systèmes d'hémodialyse par adsorption / l'élimination des toxines urémiques classiques tels que l'urée et la créatinine, ainsi que d'autres toxines 30. Il a également été démontré que le butyrate modifie la génération de la pro cytokines fibrotique croissance transformant le facteur-bêta (TGF-1) par les cellules épithéliales rénales, et que la supplémentation alimentaire avec un exsudat de polysaccharide traité naturellement d'Acacia Sénégal peuvent augmenter le butyrate de sérum, qui, au moins in vitro. a des effets bénéfiques sur la production de cytokines pro-fibrotique rénale 31. Dans le présent travail, nous avons étendu nos observations antérieures sur les effets du traitement GA sur des rats avec adenineinduced CRF 21. en étudiant les mécanismes anti-inflammatoires et antioxydantes liées à l'effet protecteur de GA sur CRF induite par l'adénine, en utilisant plusieurs paramètres nouveaux telles que l'IL-10, ainsi que la génération d'espèces réactives de l'oxygène et des ruptures de brins d'ADN. Les résultats de notre étude va encore expliquer les mécanismes des effets bénéfiques de la GA. Résultats de la gomme arabique améliore induite Adénine-Insuffisance rénale Dans le modèle CRF utilisé dans la présente étude, l'adénine est donnée mélangée avec la charge à une concentration de 0,75, p / p, pendant 4 semaines. Oralement adénine administré est métabolisé à 2,8-dihydroxyadénine, qui précipite et forme des cristaux tubulaires qui blessent le tissu rénal. Nous pourrions confirmer ici les effets signalés précédemment 21. 22 que l'adénine d'alimentation (0,75 pour 4 semaines) a provoqué une augmentation significative (P0.01) (Fig. 1). Le traitement par GA diminua de manière significative l'effet adénine. Comme autre marqueur de la lésion rénale, d'une protéinurie a été analysé (fig. 1), montrant une augmentation significative de la protéine excrétée dans les rats traités par l'adénine, qui a été réduite de manière significative par GA, mais pas complètement. L'examen histopathologique des reins a révélé extensives des signes d'inflammation et de la fibrose dans les reins des animaux traités avec l'adénine (fig. 2 et Tableau 1), ainsi que des dommages glomérulaire (tableau 1). GA réduit de manière significative ce dommage morphologique (tableau 1). Étendre la Figure 1. créatinine plasmatique (A) et la clairance de la créatinine (B), ainsi que la protéinurie (C) chez des rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et des rats traités avec l'adénine (0,75 m / w) seul dans les aliments ou avec l'adénine et la gomme arabique administré en même temps à la même dose pendant 28 jours. Chaque colonne et barre verticale représente la moyenne SEM (n 6). p0.001 par rapport à un traitement adénine. Plus Développer la Figure 2. Présence de l'inflammation (A) dans les reins des rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et des rats traités avec l'adénine (0,75 m / m) seulement dans les aliments ou avec l'adénine et la gomme arabique administration concomitante à la même dose pendant 28 jours. Les flèches noires dans les images représentatives des tissus colorés avec point de hemytoxylin à infiltration leucocytaire. Apparition d'une fibrose (B) dans les reins des rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et des rats traités avec l'adénine (0,75 m / m) seulement dans les aliments ou avec l'adénine et la gomme arabique administration concomitante à la même dose pendant 28 jours. Montré sont des images représentatives de la fibrose dans le rein, avec des flèches noires pointant vers des exemples de disposition de collagène, visualisé par Sirius Rouge coloration. Plus Développer Tableau 1. Effet du traitement de rats avec de la gomme arabique (GA, 15 p / v dans l'eau potable), avec ou sans l'adénine dans l'alimentation (0,75 p / p) pendant 28 jours sur les paramètres histopathologiques. Effet de la gomme arabique sur la CRP et TNF CRP était significativement (P0.05) a diminué à environ 51 chez les rats traités avec l'adénine ainsi que GA, en comparaison avec les rats traités avec l'adénine seule (Fig. 3). La concentration de TNF-a dans l'urine et le plasma a été augmenté de façon significative dans le groupe traité par l'adénine, et cette augmentation a été marquée et significativement diminuée chez les rats traités à la fois avec l'adénine et GA (fig. 4). Développer Figure concentration 3. Plasma protéine C-réactive chez les rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et les rats traités avec l'adénine (0,75 p / p) seul dans les aliments ou avec l'adénine et la gomme arabique donnée de façon concomitante à la même dose pendant 28 jours. Chaque colonne et barre verticale représente la moyenne SEM (n 6). p0.05 par rapport à un traitement adénine. Développer plus la Figure 4. nécrose tumorale concentration Factor - dans l'urine (A) et du plasma (B) chez des rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et des rats traités avec l'adénine (0,75 p / p) seul dans les aliments ou avec l'adénine et la gomme arabique administré en même temps à la même dose pendant 28 jours. Chaque colonne et barre verticale représente la moyenne SEM (n 6). p0.001 par rapport à un traitement adénine. Effet de la gomme arabique sur l'IL-10 Les concentrations de la cytokine anti-inflammatoire IL-10 ne sont pas détectables chez les rats traités avec de l'eau (témoins) et d'adénine (fig. 5). Cependant, la concentration de cette cytokine a été significativement augmentée chez les rats traités (GA-P0.001) par rapport au témoin et les rats traités par l'adénine. Chez les rats traités avec l'AG et l'adénine, la concentration d'IL-10 n'a pas été significativement différents de ceux des rats traités par GA seul. Étendre la figure 5. Interleukin 10 (IL-10), la concentration dans le plasma des rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et des rats traités avec l'adénine (0,75 m / m) seulement dans les aliments ou avec adénine et la gomme arabique donnés simultanément à la même dose pendant 28 jours. Chaque colonne et barre verticale représente la moyenne SEM (n 6). p0.001 par rapport à un traitement adénine. Antioxydantes Effets de la gomme arabique Comme le montre la Fig. 6A et B. la formation de superoxyde était significativement plus élevée dans les reins des rats traités par l'adénine par rapport aux reins de contrôle, GA ou GAadenine. GA a diminué la production de superoxyde pour contrôler les niveaux. ADN cassures double brin ont également augmenté de façon significative dans le rein par traitement adénine (Fig. 6C). GA a réduit cet effet de manière significative, mais n'a pas été en mesure de restaurer les niveaux de contrôle. Le tableau 2 montre les concentrations en GSH et Taoa, ainsi que l'activité de la SOD dans les quatre groupes. traitement adénine réduit de manière significative les valeurs de ces analytes par rapport aux témoins et les rats traités (GA-P0.05). GA amélioré de manière significative ces actions chez le rat adénine-traitée. Étendre la figure 6. Les images représentatives de la formation de superoxyde visualisées en utilisant le dihydroethidium de colorant sur cryocoupes des reins (A). Dismutase (B) et l'ADN double formation de rupture de fil (C) chez les rats témoins, des rats traités avec de la gomme arabique (15 p / v dans l'eau potable) et les rats traités avec l'adénine (0,75 p / p) seul dans l'alimentation, ou avec l'adénine et la gomme arabique administration concomitante à la même dose pendant 28 jours. Chaque colonne et barre verticale représente la moyenne SEM (n 5). p0.001 par rapport à un traitement adénine. Plus Développer Tableau 2. Effet du traitement de rats avec de la gomme arabique (GA, 15 p / v dans l'eau potable), avec ou sans l'adénine dans l'alimentation (0,75 p / p) pendant 28 jours sur les indices du stress oxydatif dans le cortex rénal et plasma . Discussion L'incidence mondiale de la maladie rénale chronique augmente 32. mais l'accès à la thérapie de remplacement rénal, soit transplantaion ou la dialyse est limitée dans plusieurs régions du monde en raison d'un manque de ressources financières et cliniques 33. 34. Les stratégies visant à retarder l'apparition de la dialyse ou pour atténuer l'urémie comptent souvent sur les compléments alimentaires. GA, traditionnellement utilisé comme substance d'hygiène buccale et pour traiter l'inflammation de la muqueuse intestinale et inflammation de la peau, a été trouvé pour augmenter fécale l'excrétion d'azote et d'abaisser l'urée sérique concentration d'azote dans les années 90 25. 29. et donc est depuis utilisé dans la médecine populaire pour traiter CKD 27. a côté de l'augmentation de la clairance de l'azote dans CKD, GA a d'autres effets bénéfiques sur la fonction rénale, ce qui pourrait être due à ses effets anti-inflammatoires et anti-oxydantes, comme indiqué dans cette étude. l'insuffisance rénale induite par l'adénine-est le modèle le plus souvent utilisé induite chimiquement animal expérimental pour CKD. L'inflammation et le stress oxydatif dans ce modèle expérimental, mis en place il y a 35 trois décennies ont, pour autant que nous sommes conscients, pas été étudié en détail avant. On en sait plus sur l'implication du stress oxydatif et de l'inflammation dans le modèle RKM, tel que démontré par Kim et al. 36 par exemple. Dans la présente étude, comme dans nos travaux précédents, le traitement adénine induit tous les signes classiques d'insuffisance rénale indiqué précédemment 21. 22. Par souci de concision, dans ce travail nous avons rapporté les effets de l'adénine sur la créatinine plasmatique, la clairance de la créatinine, et la protéinurie. GA a été montré pour agir comme un anti-oxydant, et de moduler les processus inflammatoires et / ou immunologiques 17. Par exemple, les effets cytoprotecteurs de GA contre la néphrotoxicité induite par le cisplatine et induite par le cyclophosphamide vessie cytotoxicité chez les rats ont été attribués à une action de piégeur contre les métabolites réactifs de l'oxygène 37. 38. GA a également été rapporté pour avoir une action d'amélioration partielle contre la néphrotoxicité induite par la gentamicine expérimentale chez le rat 39. Dans le présent travail, nous avons testé dans le tissu rénal, le plasma et l'urine des rats, l'effet du traitement GA (15 dans l'eau potable pendant 4 semaines) sur plusieurs marqueurs de stress inflammatoire et oxydatif établies chez les rats avec adenineinduced CRF. Il est connu que les échantillons des différents produits GA peuvent être de nature variable, en fonction de leur source et leur emplacement. Ici, nous avons utilisé un Acacia Sénégal var. échantillon Sénégal, qui a été mûri pour produire un matériau de test standardisé et reproductible, avec un poids moléculaire connu 31. Comme un signe d'inflammation, l'infiltration tissulaire de globules blancs a été observée à l'examen histopathologique des reins des animaux adénine-traitée, qui a été supprimée de manière significative chez les animaux traités avec l'adénine avec GA. La CRP est un réactif de phase aiguë qui est augmentée dans l'inflammation et l'infection et a été longtemps utilisé comme marqueur biologique indiquant ces conditions 40. Il a été démontré être augmentée dans le plasma des rats RKM 41. Les résultats montrent que la co-administration de AG à des rats traités par l'adénine a entraîné une réduction significative de la concentration plasmatique de la CRP, bien que le traitement GA seul n'a pas été efficace pour modifier son niveau. Tout récemment, Mahmoud et al 42 rapporté que des rats nourris avec l'adénine pendant 8 semaines (plus habituelles 4 semaines), l'augmentation de la concentration sérique de la protéine C réactive et quelques paramètres antioxydants, et que ces actions GA atténués. La CRP est connue comme médiateur stimuler la libération d'autres cytokines pro-inflammatoires telles que l'IL-6 et TNF-a 43. Le traitement avec l'adénine a induit une augmentation marquée de TNF-a, ce qui est en grande partie en concordance avec les résultats des autres cytokines quantifiés. IL-10 est connu pour agir dans différents types de cellules où il supprime les réponses inflammatoires 44. L'une des conclusions les plus frappantes de cette étude était que le traitement avec GA seul induit une augmentation significative de la concentration plasmatique d'IL-10. La co-administration de AG et adénine réduit légèrement la concentration de cette cytokine anti-inflammatoire. Une preuve directe pour une action anti-inflammatoire de GA, comme l'induction de l'IL-10, n'a pas, pour autant que nous le savons, été rapporté. Cependant, GA renforce le système immunitaire chez les souris 24. et induit une action anti-inflammatoire apparent lorsqu'il est utilisé contre l'inflammation gingivale 45. Il a récemment été rapporté que la supplémentation alimentaire avec les fibres solubles supprime l'inflammation intestinale chez les souris IL-10 déficient en 46. Les espèces réactives de l'oxygène altèrent directement la fonction mitochondriale, la synthèse des protéines et de la structure, la synthèse d'ADN et les mécanismes de réparation cellulaire 47. Le stress oxydatif se trouve déjà à un stade précoce de la maladie rénale et augmente avec la diminution de la fonction rénale 48. CRF induit adénine, jusqu'à ce que le stress maintenant oxydatif cela a été démontré dans le coeur et dans le système vasculaire 49. 50. si tel est le premier compte de l'augmentation de la production de superoxyde dans les reins. dommages à l'ADN dans les maladies du rein a été détecté pour la première dans le modèle / sel DOCA, où l'ADN simple et cassures double brin ont été trouvés 51. Par conséquent, le modèle de CRF induit adénine-utilisé ici est seulement le deuxième modèle d'insuffisance rénale dans laquelle les dommages de l'ADN a été analysé . Dans les deux modèles, la source de l'endommagement de l'ADN semble être une augmentation du stress oxydatif. La capacité antioxydante de GA pourrait empêcher la formation de superoxyde complètement et les oxydatives cassures double brin d'ADN induite par le stress dans une certaine mesure. ADN cassures double brin sont des lésions graves, initiant l'instabilité génomique, induisant la mort cellulaire ou même des mutations 52. Une quantité d'anions superoxydes et une incidence réduit de cassures double brin abaissé pourrait expliquer en partie l'effet positif de GA sur la progression de la maladie rénale. Cet effet positif peut éventuellement être attribuée à la capacité de GA à abaisser la pression sanguine chez les rats traités par l'adénine 23. Comme nous et d'autres ont montré une augmentation de ROS chez des animaux souffrant d'hypertension 51. 53. 54. En conclusion, ce travail fournit une preuve directe des capacités anti-inflammatoires et anti-oxydantes de GA. GA a pu réduire les niveaux élevés de plusieurs cytokines pro-inflammatoires dans le plasma et les reins des rats souffrant de CRF induit adénine. En outre, il pourrait atténuer une perte de défense antioxydant et de diminuer la production de superoxyde induite par l'adénine et l'ADN cassures double brin, deux paramètres de dommages montrés pour la première fois dans ce modèle de CRF. Ces capacités anti-inflammatoires et anti-oxydantes de GA ajouter à l'explication de ses actions bénéfiques en tant que complément alimentaire chez les patients souffrant de maladie rénale chronique. Matériels et rats Méthodes Animaux mâles Wistar (âgés de 910 semaines, pesant 24,910 g) ont été logés dans une chambre à une température de 222C, humidité relative d'environ 60, avec un cycle de lightdark 12 h (lumières sur 600), et un accès gratuit à la norme sédimenter régime alimentaire chow contenant 0,85 phosphore, calcium 1,12, 0,35 magnésium, 25,3 protéines brutes et de 2,5 UI / g de vitamine D3 (Oman Flour Mills, Muscat, Oman) et de l'eau. Les procédures impliquant des animaux et leurs soins ont été effectués en conformité avec les lois et les politiques internationales (directives 86/609, JOL 358, 1er décembre, 12 du Conseil CEE de 1987 Guide NIH pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire, NIH Publications n ° 8523, 1985), et la clairance éthique a été obtenue auprès du Comité de l'Université Sultan Qaboos Petit animal éthique de la recherche. Modèle expérimental Après une période d'acclimatation d'une semaine, les rats (n 24) ont été répartis au hasard en quatre groupes égaux et traités pendant quatre semaines consécutives. Le premier groupe a continué à recevoir le même régime alimentaire sans traitement jusqu'à la fin de l'étude (groupe témoin). Le second groupe a été commuté à un régime alimentaire contenant de l'adénine en poudre (0,75 en poids / poids dans l'alimentation). Le troisième groupe a reçu de la nourriture normale et GA (EM SUPERGUM 10) dans l'eau de boisson à une concentration de 15 p / v. Le quatrième groupe a reçu l'adénine dans l'alimentation comme dans deux groupes, plus GA dans l'eau potable à une concentration de 15 p / v. La dose d'adénine a été choisi à partir de la méthode originale par Yokozawa et al. 55 et la dose de GA a été choisi sur la base de nos expériences précédentes avec GA 21. 23. Il a été légèrement augmenté dans ce domaine et d'autres études ultérieures 56. afin de maximiser l'effet de GA. Au cours de la période de traitement, les rats ont été pesés chaque semaine. Pour la collecte de l'urine, ils ont été placés individuellement dans des cages métaboliques pendant 24 h, après la période de traitement de 28 jours. Le matin après le prélèvement métabolique, les rats ont été anesthésiés avec une injection intraperitoneale de kétamine (75 mg / kg) et de xylazine (5 mg / kg) et du sang (environ 3,5 ml) a été prélevé dans la veine cave antérieure et placée dans des tubes héparinisés. Le sang et les urines ont été centrifugés à 900 g à 4 ° C pendant 15 min. Le plasma obtenu, en même temps que les échantillons d'urine a été conservé à 80 ° C en attendant l'analyse dans les 4 semaines suivant la fin du traitement. Les deux reins ont été excisés, épongé sur papier filtre et pesés. Le reste des reins ont été conservé congelé à 80 ° C pendant l'attente de l'analyse biochimique dans les trois jours. Le rein gauche a été homogénéisée dans un tampon de Tris glacé (pH 7,4) pour obtenir un 10 poids / volume d'homogénat. Celui-ci a été centrifugée à 1500 g à 4 ° C pendant 15 min et le surnageant obtenu a été utilisé pour mesurer le glutathion (GSH) et la superoxyde dismutase (SOD). Méthodes biochimiques Les concentrations de créatinine dans le plasma et l'urine ont été estimées en utilisant spectrophotométrie kits commerciaux (Biomérieux, Marcy-lEtoile, France). clairance de la créatinine (CCR) a été calculé comme rapporté par Duarte et al. 57. protéinurie a été mesurée avec un kit de HUMAN GmbH (Wiesbaden, Allemagne). activité antioxydante totale (Taoa) a été mesuré dans le sérum en utilisant un kit d'Oxford Biomedical Research (Oxford, MI, USA). Dans les homogénats de cortex rénal, le glutathion (GSH), la concentration a été mesurée avec une méthode spectrophotométrique et 58. La superoxyde dismutase (SOD) avec un kit de Randox, Antrim, Royaume-Uni. La protéine C réactive (CRP) a été mesurée à l'aide d'un kit ELISA de Genway Biotech, Inc. (San Diego, CA, USA), respectivement. Facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-a) et l'interleukine-10 (IL-10) ont des kits ELISA de RD Systems Europe Ltd (Abingdon, Royaume-Uni). Histopathologie Pour enquête histopathologique des reins 2 m sections ont été coupées et colorées avec de l'hématoxyline, périodique acide tache-Schiff (PAS) ou Sirius Red tache. Dans les reins l'indice glomérulaire de la sclérose en plaques (GSI) et l'indice de mésangiolyse (MSI) ont été déterminées comme décrit dans 59. Fibrose a été séparement évaluée sur Sirius Red lames colorées et de l'inflammation sur des lames de hématoxyline colorées à moins de 40 (fibrose) ou 80100 (inflammation) champs visuels en utilisant une notation semiquantitatif allant de 0 à 4 (classe 00 fibrose, grade 1: 75 fibrose). Immunohistochimie pour - H2AX (Mesure de sauts d'ADN double brin) des sections de rein congelées (5 m) ont été transférés de 80C à stocker pendant 20 min dans 20C. Les sections ont été fixées dans du formaldéhyde 4 pendant 15 min à température ambiante et ensuite pendant 5 min dans du methanol à 20 ° C. Le peroxyde d'hydrogène (3 dans le methanol) a été appliqué pendant 10 minutes, suivie d'une incubation pendant 1 h à température ambiante dans 10 le sérum d'âne normale (Chemicon, Amersfoort, Pays-Bas). Phospho-Histone H2A. X (Ser139) (20E3) Lapin monoclonal Ab (Cell Signaling, Danvers, États-Unis 1200) a été appliqué et incubé pendant une nuit à 4 ° C. Les coupes ont été ensuite rincées dans du PBS et incubées avec un anticorps secondaire anti-lapin d'âne conjugué à la rhodamine (Santa Cruz, Santa Cruz, USA 1100) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage dans du PBS / Tween 0,2 v / v pendant 5 min, les sections ont été colorées avec l'ADN tache bisbenzimide (AppliChem, Darmstadt, Allemagne 10 g / ml) pendant 3 min. Les sections ont été lavées avec du PBS et montées avec confocale Matrix (Micro Tech Lab, Graz, Autriche). images immunofluorescence ont été capturées à l'aide d'un microscope Eclipse55i (Nikon GmbH, Düsseldorf, Allemagne) et un Fluoro Pro MP 5000 Caméra (Intas Sciences Instruments Imaging GmbH, Gttingen, Allemagne) à un grossissement de 200 fois. Images excités à 465,495 nm pour les foyers de - H2AX positif (fluorescence rouge) ont été fusionnés avec ceux excités à 330380 nm pour bisbenzimide (fluorescence bleue). Pour la quantification, 8 champs microscopiques non chevauchantes de cortex rénal ont été analysées par le logiciel d'analyse d'images de cellules CellProfiler (Broad Institute, Cambridge, USA). Mesure de formation de superoxyde production de superoxyde sur 5 m cryosections (Leica CM 3050 S, Leica Microsystems, Wetzlar, Allemagne) a été détectée après coloration des sections pendant 20 minutes avec 10 M dihydroethidium (Merck, Darmstadt, Allemagne) à la température ambiante dans l'obscurité. Les photos ont été prises avec un microscope 55i Eclipse (Nikon GmbH, Düsseldorf, Allemagne) à 200 fois le grossissement. Quantification a été fait avec CellProfiler (Broad Institute, Cambridge, USA) en mesurant les valeurs de gris dans 812 champs microscopiques ne se chevauchent pas. Les médicaments et les produits chimiques utilisés gomme d'acacia: SUPERGUM EM 10, Lot 101008, 1.1.11 (SanwaCho, Toyonaka, Osaka, Japon). Adénine a été obtenue auprès de Sigma (St. Louis, MO, USA). Des solutions aqueuses de ces deux composés ont été préparés fraîchement chaque jour. Les propriétés chimiques de l'AG ont été entièrement revue avant 17. Tous les produits chimiques utilisés sont de qualité analytique. SUPERGUM EM 10 a été caractérisée par un fractionnement de taille suivie par angle multiple diffusion de la lumière laser (GPC-MALLS) pour donner son profil moléculaire. La masse moléculaire moyenne était de 3,4310 6. et la teneur en protéine arabinogalactane (AGP) était de 26,4. L'analyse statistique statistique a été effectuée en utilisant GraphPad Prism 4.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) ou SPSS Statistics 19 (IBM, Ehningen, Allemagne). Chaque groupe était constitué de 6 animaux. Toutes les données sont exprimées en tant que moyen E. T.M. des moyens de groupe ont été comparés à une analyse de variance (ANOVA) suivie par Tukeys test de comparaison multiple. Les valeurs de p0.05 ont été considérées comme significatives. Remerciements Merci sont dues à SanwaCho. Japon pour un échantillon gratuit de SUPERGUM, et le personnel de la Chambre des animaux SQU pour soigner les rats. Contributions des auteurs Conçu et développé les expériences: BHA. Joué les expériences: IA-H SB AAS AN SS. Analyse des données: BHA IA-H SB AAS AN SS NQ NS. A écrit le papier: BHA AN NS. Références 1. Couser GT, Remuzzi G, Mendis S, Tonelli M (2011) La contribution de la maladie rénale chronique à la charge mondiale des maladies non transmissibles majeures. Kidney Int 80: 12581270. 2. Himmelfarb J (2004) Lier le stress oxydatif et l'inflammation dans les maladies rénales: qui est le poulet et qui est le Semin oeuf Dial 17: 449454. 3. Cachofeiro V, Goicochea M, de Vinuesa SG, Oubina P, Lahera V, et al. (2008) Le stress oxydatif et de l'inflammation, un lien entre la maladie rénale chronique et les maladies cardiovasculaires. Kidney Int Suppl: S49. 4. Manning RD Jr, Tian N, Meng S (2005) Le stress oxydatif et le traitement antioxydant dans l'hypertension et les dommages rénaux associés. Am J Nephrol 25: 311317. 5. 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